酿脓链球菌

酿脓链球菌（ ），即 A 群链球菌（ Group A streptococcus, GAS），为 β 溶血、对 杆菌肽敏感、 PYR 阳性，具有兰氏 A 群抗原，在血平板上形成大 菌落，是人体的重要致病菌之一，可以引起很多种疾病，因此早期 GAS 还被称为丹毒链球菌（ ）和 猩红热链球菌（ ）等。酿脓链球菌属 链球菌科（ Streptoccaceae ）、链球菌属（ Streptococcus ）。链球菌属细菌种类繁多，其传统的分类方法主要有以下两种， （ 1 ） 根据血平板上菌落的溶血现象可以分为三种， ① 甲型 溶血性链球菌( α-Hemolytic streptococcus) ：菌落周围有 1mm~ 2mm 的溶血环，呈草绿色，称甲型溶血或 α 溶血。甲型溶血性链球菌可分为草绿色链球菌（ ）和肺炎链球菌（ ）。草绿色链球菌常常寄生在口腔、胃肠道、女性生殖道，为人体的 正常菌群。肺炎链球菌亦称 肺炎球菌（ Pneumococcus ），是肺炎的重要致病菌，还可引起中耳炎或脑膜炎，最早被称为 肺炎双球菌，由于在液体培养基中形成长链，后来更名为肺炎链球菌。 ② 乙型溶血性链球菌( β-Hemolytic streptococcus) ：菌落周围有 2mm~ 4mm 界限分明、完全透明的溶血环，称乙型溶血或 β 溶血，乙型溶血性链球菌致病力强，能引起很多种疾病， ③ 丙型链球菌 ( γ-Streptococcus) ：菌落周围无溶血环，一般不致病，为口腔，鼻腔及肠道的正常菌群； (2) 又根据表面群特异性多糖抗原（兰氏血清学试验），链球菌分为 A 、 B 、 C 、 F 、 G 等 18 个群，其中引起人类感染的 90% 链球菌属于 A 群，而 A 群链球菌大部分是乙型溶血性链球菌，因此还被称为溶血性链球菌（ ）。另外， A 、 C 、 G 群 β 溶血性链球菌可分为两组：大菌落组（直径大于 0.5mm ）和小菌落组（直径小于 0.5mm ）。形成大菌落的 A 、 C 、 G 群化脓性链球菌，具有多种有效的致病机制。而形成小菌落的具有兰氏 A 、 C 、 G 群抗原的 β 溶血性链球菌，在遗传上与化脓性 菌株不同，属于 咽峡炎群（ Anginosus group ）或 米勒链球菌群 ( group) ，目前该菌群包括咽峡炎链球菌，星座链球菌和中间链球菌。该群链球菌具有不同的兰氏抗原，是口腔和生殖道正常菌群的组成部分，有可能参与感染的形成（主要是脓肿），也有可能作为共生菌被分离。

GAS 目前已有 13 个全基因组序列，以 M1 型菌株（ SF370 ）为例 (1) ，其基因组大小为 1 ， 852 ， 442 个 碱基对， G + C 含量为 38.5% ，是 革兰氏阳性菌中属 G + C% 较低家族中的一员。基因组中共预测了 1 ， 752 个 ORF ，其中有 1 ， 282 个（ 83% ）与其他菌种已有的假想蛋白或同源蛋白相匹配，这些菌种包括枯草杆菌、乳酸乳球菌及其他链球菌。共有 79 个稳定的 RNA基因，其中包括 6 个 rRNA 操纵子。另外，将近 10% 的 ORF （ 176 个）与 前噬菌体（ prophage ）或转 座子基因有关，前噬菌体基因组共有四个，分别携带及编码不同的毒力基因如链球菌致热 外毒素（ SPE, streptococcal pyrogenic exotoxins ）。这些毒力基因一般位于 噬菌体基因组的末端即整合位点附近，而且 G+C 含量在 26%~30% 之间，明显低于临近的噬菌体其他基因或整个染色体的平均 G+C% （ 38.5% ），说明这些基因可能是从其他菌获得 , 另外某些链球菌致热外毒素还与 金黄色葡萄球菌的 肠毒素具有 同源性，但是这些基因的具体来源目前尚不清楚。 GAS 基因组中普遍存在的前噬菌体基因组可以使毒力基因水平转移，这种转移不仅可以产生高致病性菌株，而且对 GAS 的进化也具有非常重要的促进作用。

根据卫生部颁发的《人间传染的 病原微生物名录》， GAS 属于危害程度分类第三类细菌，大量的活菌操作及样本检测包括病原体分离纯化、药敏试验、生化鉴定、免疫学试验、 PCR 核酸提取、显微镜观察等操作须在 生物安全二级实验室进行。对于非感染性材料的操作可在生物安全一级实验室进行。

GAS 为需氧或兼性厌氧。营养要求较高，常规用培养基为含 5 %脱纤维羊血的 TSA 培养基（ Tryptic Soy Agar， Difco 公司 ）或哥伦比亚琼脂培养基。初代培养需要 5% CO2的环境 , 因为富含 CO 2 的空气可促进许多链球菌的生长及溶血性，最适温度 35 ℃ ~ 37 ℃ ，最适 pH 7.4~7.6 。在液体培养基中为絮状或颗粒状沉淀生长。在血平板上，经 37 ℃ 培养 24 小时后可形成灰白色、表面光滑、圆形、凸起、边缘整齐、直径为 0.5mm ～ 0.75mm 的细小菌落，少数菌落表面可呈干涩，菌落周围形成透明的溶血环（图 3-1 ）。虽然有文献报道厌氧条件和 选择性培养基（添加磺胺甲基异噁唑）可以提高 GAS 的 检出率，但目前尚未得到公认 (2) 。

影响 GAS 检出率的另一重要因素是培养时间，对标本进行分离培养时，首次培养 18~24 小时即可检出 GAS ，如果观察结果为阴性，应再培养 24 小时后重新观察，可明显提高 GAS 的检出率 (3) 。

液体培养基包括 TSB 肉汤（ Tryptic Soy Broth ）和 THB 肉汤（ Todd-Hewitt Broth ）或 BHI 肉汤，可从 Difco 公司购买，也可自行配制葡萄糖磷酸缓冲液肉汤，其中 THB 肉汤特别用于血清分型的 GAS 培养。

图 3-1 GAS 菌落形态 （ 37 ℃ ， 5%CO 2 ， 24 小时 ）

链球菌镜下呈球形或卵圆形，直径约 0.5~1.0μm ，呈链状排列，链长短不一，在液体培养基中易形成长链。（图 4-1 ）无芽孢，无鞭毛。多数菌株在培养早期（ 2~4 小时）形成透明质酸 荚膜。链球菌易被普通的碱性染料着色，自病灶新分离株为革兰染色阳性，老龄菌或被吞噬后的细菌可转成革兰阴性。