eIF3参与了真核翻译起始进程中大多数的反应。eIF3可以与游离的40S核糖体亚基结合,阻止40S亚基与60S核糖体亚基的直接结合,从而防止形成无翻译活性的80S核糖体;通过与eIF2的相互作用,eIF3可以使eIF2•GTP•Met-tRNAi三联体复合物稳定地结合到40S亚基上,并促使43S前起始复合物的形成;eIF3可能通过与eIF4G的相互作用来或者通过直接与mRNA结合,促进mRNA与40S亚基结合,从而帮助48S前起始复合物的形成。eIF3也在重起始(reinitiation)的扫描和起始AUG密码子的选择中发挥作用。 除了在翻译起始过程中发挥核心作用,eIF3还被发现参与翻译过程以及细胞周期的调控。通过调节不同类型的mRNA的翻译起始,eIF3就可能选择性地调控蛋白的合成,从而对细胞的生长进行调控。而eIF3的a、b、e和k亚基都可能参与细胞周期调控。