双缩脲反应

双缩脲反应(3)在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）与铜离子（Cu2+）作用，形成紫红色络合物（该物质的分子结构式见图），该反应即双缩脲反应。

铜溶液作用，就会形成紫色或蓝紫色络合物。

注：除-CO-NH-有此反应外，酰胺（-CONH2）、亚甲基（-CH2-）、亚氨基（-NH-）、（-CS-CS-NH2）等基团亦有此反应。

由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应，且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关，故可用双缩脲法测定蛋白质的含量（借助分光光度计可减小误差）。

双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。且使用试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为1～10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。

双缩脲试剂由NaOH溶液（0.1g/mL）和CuSO4溶液（0.01g/mL）配制而成，配制比例为5：1。但是双缩脲试剂不用现配现用，先加入NaoH营造碱性环境，再加入CuSO4。这是与斐林试剂不同的地方。