蛋白质非酶糖化

1.1材料D-(6-3H)葡萄糖50Ci/mmol，北京同位素公司；人血清白蛋白(HSA)，Sigma产品；牛血清白蛋白(BSA)，Sigma产品：闪烁液Clear-soll购于NacalaiTesqueInc;TritonX-100,武汉中建科技发展有限公司；氨基胍，Sigma产品。

1.2仪器LKB-1219液体闪烁仪：LDZ5-2高速离心机。

1.3方法[1]HAS糖化分三组进行。空白对照组：含D-（6-3H）葡萄糖5nmol/L、HSA7mg/ml、PBS0.2mol/L(pH7.4)；给药组与阳性药物组另加受试药物或氨基胍，总反应体系为1ml。于37℃保温8天，每天取样100μl，加入BSA(10mg/ml)50μl，然后加入1ml预冷10%三氯醋酸沉淀蛋白，2500r/min离心10分钟，倾去上清液，用10%三氯醋酸洗沉淀两次，最后溶于水溶液，测定D-(6-3H)葡萄糖与蛋白质结合的放射量(cpm)表示。

蛋白质非酶糖化用D-(6-3H)葡萄糖与蛋白质结合的放射量(cpm)表示。HSA在一定浓度的葡萄糖存在下保温8天后出现了明显的糖基化反应。第1、2天结合速度很快，以后逐渐减慢，第6天后趋于平稳。

在高糖环境下，机体组织的许多重要蛋白质的非酶糖化反应增强，导致功能障碍，这是造成糖尿病晚期并发症的主要原因。本次实验结果也证实，葡萄糖与HSA在体外经一段时间的保温后发生了非酶糖基化反应。葛根素、银杏黄酮均为黄酮类化合物，其抑制蛋白质糖基化的机制可能是选择性阻断AGEs前体物质的生成；也可能是阻断葡萄糖衍生物能进一步与其化蛋白质交联。

中医药在治疗糖尿病及其晚期并发症方面有着悠久的历史，而这些治疗作用可能与其具有抑制蛋白质非酶糖化作用相关，这对有关药物有效组分的进一步研究有着重要意义。