蛋白质印迹杂交

先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，将蛋白质样品i溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，经SDS~：PAGE电泳将蛋白质按分子质量大小分离，再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜（硝酸纤I维素膜或尼龙膜）上，接着将膜浸泡在高浓度的i蛋白质溶液中温育，以封闭其非特异性位点。然后加入特异抗体（一抗）膜的目的蛋白（抗原）：与一抗结合后，再加入能与一抗专一性结合的带i标记的二抗（通常一抗用来源于兔的抗体时，二抗常用羊抗兔免疫球蛋白抗体），最后通过二抗上带标记化合物（一般为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶）的特异性反应进行检测。