菌种的培养

经过高中的学习，大部分对生物都有了比较具体的理解。进入大学以后要进行更为具体的生物研究，要进行分类。菌种的培养是微生物研究的必要过程，是今后在实验室必要的实验技能！菌种在有机实验中也是基础，所以，对于大部分同学来说，这是一个新鲜而没有基础的东西，一切从基础开始！

菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

种子制备包括孢子制备和菌丝体制备（见图） 菌种制备 ，其中(1)～(4)为孢子制备过程。

保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液、牛肉膏及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。

如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

1. 弄清一级菌种的制作流程。

2. 弄清一级菌种的培养基的配制方法及其要求。

3. 弄清灭菌，消毒，菌种分离，提纯，转管，无菌操作概念及其操作方法。

4. 掌握一级菌种质量鉴定及其常见保存方法。

1. 一级菌种培养基的配制。

2. 一级菌种培养基的灭菌。

3. 无菌操作（难点）。

多媒体教学（课内），实验教学（课内及课外），技能训练（实习期间）

从学生日常生活问题入手，快速自然的引导学生走进主题，明确本节课的学习目标，引发学生积极思考。

讲授新课内容，以醒目的方式将条件语句的格式、功能和执行过程呈现给学生。

学生以小组合作的方式，在讨论与探究中完成任务。

学生自己动手实践，把培养基给学生，通过诸多问题驱动学生完成任务，课程安排形成循序渐进的梯度，充分挖掘学生潜力。

展示评价环节，让学生在交流讨论中明确条件选择语句的执行流程及使用方法，在结束环节，以课后作业强化练习法结束本节课，使学生对条件语句的暂时记忆转化为长期记忆。